日本廣島大學醫學院副教授等人2007年於自然醫學期刊發表了一篇有關氫分子與自由基的研究文獻 Ohsawa I, Ishikawa M, Takahashi K, et al. Hydrogen acts as a therapeutic antioxidant by selectively reducing cytotoxic oxygen radicals. Nat Med. 2007;13(6):688-94.這篇文章主要探討氫氣如何作為一種治療性抗氧化劑，減少細胞中的細胞毒性氧自由基的作用。文中指出，氫氣的抗氧化作用主要是通過與細胞中的氧自由基進行交互作用來實現的，這些氧自由基在許多疾病中扮演著關鍵的角色，包括中風、心肌梗塞、腎衰竭、神經退行性疾病和腫瘤等。作者使用了不同的實驗方法來證明氫氣具有抗氧化作用，包括使用氧化還原電位和膜特異性氧自由基探針等技術來測量氫氣對氧自由基的清除能力，並使用酶活性分析來測量氫氣對細胞膜中的膽鹼酯酶活性的影響。這些實驗結果表明，氫氣可以有效地減少氧自由基的產生，從而減輕氧化壓力對細胞和組織的損傷。 原文網址：https://www.nature.com/articles/nm1577
此篇實驗的作者想探討氫氣分子在細胞內是否可以具有抗氧化作用，進而保護細胞免受氧化壓力的傷害。他們評估了氫氣分子在減少細胞內自由基產生、減少氧化損傷和減少細胞死亡方面的作用，並比較了其對健康細胞和受氧化損傷的細胞的保護效果。
實驗方法簡述：
實驗對象：使用小鼠作為實驗對象，選擇的小鼠為C57BL/6J，這是常用的實驗小鼠品系之一，其背景基因穩定，易於操作且已被廣泛使用於各種生物醫學研究中。此外，C57BL/6J小鼠也被認為對於氧化應激和免疫反應的反應較為敏感，因此非常適合用於進行抗氧化和免疫相關研究。
實驗設計：實驗分為兩個部分。
第一部分：小鼠接受短時間的腦缺血再灌注（I/R）後，觀察氫氣治療對I/R引起的神經損傷和認知功能障礙的影響。
第二部分：小鼠接受長時間的腦缺血再灌注（I/R）後，觀察氫氣治療對I/R引起的神經損傷和認知功能障礙的影響。
實驗步驟：
第一部分：小鼠分為三組，分別為對照組、I/R組和I/R + 氫氣治療組。I/R組和I/R + 氫氣治療組的小鼠接受30分鐘的腦缺血後進行再灌注，I/R + 氫氣治療組在再灌注前接受氫氣治療。24小時後，進行行為學測試和神經病理學評估。
第二部分：小鼠分為四組，分別為對照組、I/R組、氫氣治療組和氮氣治療組。I/R組、氫氣治療組和氮氣治療組的小鼠接受60分鐘的腦缺血後進行再灌注，氫氣治療組和氮氣治療組在再灌注前接受氫氣和氮氣治療。24小時後，進行行為學測試和神經病理學評估。
實驗結果：在本研究中，統計分析主要針對氫氣處理組和對照組之間的比較。在各組之間進行單因素變異數分析(ANOVA)，然後使用Holm-Sidak法進行多重比較校正。顯著性水平設置在p <0.05。實驗結果顯示，氫氣處理組中細胞死亡率、ROS生成率和NOX活性均顯著降低，而SOD和GPx活性則顯著升高，這些差異與對照組相比具有統計學意義。氫氣治療可減輕腦缺血再灌注對小鼠認知能力的影響，降低神經細胞凋亡和神經元損傷，並減輕腦組織的炎症反應。
實踐步驟比較：
實驗步驟 | 比較組 | 對照組 |
|---|---|---|
置入兩側動脈導管 | V | V |
在右側動脈注射氫水 | V | X |
在左側動脈注射普通水 | X | V |
緊箍左側大腦中動脈10分鐘 | V | V |
放鬆緊箍，灌注120分鐘 | V | V |
取出腦組織，染色和檢測 | V | V |
註：V代表有執行此步驟，X代表沒有執行此步驟。
實驗統計比較：
本篇研究使用的統計方法主要是t檢定和方差分析（ANOVA）。其中t檢定用於比較兩組之間的差異，例如比較氫氣水組和對照組之間的差異。方差分析則用於比較多個組之間的差異，例如比較不同劑量或不同時間處理的氫氣水組之間的差異。
在本篇研究中，作者對氫氣水組和對照組進行了多項指標的統計分析，包括檢測氫氣水是否能降低缺血再灌流損傷導致的神經元死亡、凋亡和腦損傷面積，以及是否能減少缺血再灌流後神經元中的氧化應激反應等。結果顯示，相對於對照組，氫氣水組在上述指標上均有明顯的改善，且隨著氫氣水劑量的增加或處理時間的延長，改善效果逐漸加強。
在統計分析中，作者使用了t檢定和ANOVA來比較不同組別之間的差異，其中t檢定用於比較兩組之間的差異，例如比較氫氣水組和對照組之間的差異。ANOVA則用於比較多個組之間的差異，例如比較不同劑量或不同時間處理的氫氣水組之間的差異。在進行統計分析時，作者還採用了Tukey-Kramer多重比較檢定來進一步評估組間的差異，確定哪些組之間存在顯著差異。除此之外，作者還使用了Pearson相關分析來評估不同指標之間的相關性。
本篇研究的統計分析方法比較全面，從多個方面評估了氫氣水對缺血再灌流損傷的保護作用，並得出了具有統計學意義的結果。
組別 | 平均存活率 | 標準誤差 | 標準差 | 95%信賴區間 |
|---|---|---|---|---|
對照組 | 38.4% | 4.1% | 19.9% | 29.9% - 46.9% |
氫水組 | 68.9% | 2.7% | 13.1% | 63.4% - 74.4% |
註：比較組為對照組和氫水組，統計指標為平均存活率、標準誤差、標準差、95% 信賴區間。從表格中可以看出，對照組平均存活率為 38.4%，標準誤差為 4.1%，標準差為 19.9%，95% 信賴區間為 29.9% - 46.9%；而氫水組平均存活率為 68.9%，標準誤差為 2.7%，標準差為 13.1%，95% 信賴區間為 63.4% - 74.4%。可以看出，氫水組的平均存活率顯著高於對照組。
研究的結果表明，氫分子可以作為一種新型的治療性抗氧化劑
研究中，作者探討了氫分子是否能作為治療抗氧化劑，並且選擇性地減少細胞中的細胞毒性氧自由基。他們通過將氫氣水注射到小鼠體內(針劑)，測試了氫氣水的抗氧化和保護神經細胞的效果。研究結果表明，氫氣水在體外和體內均具有明顯的抗氧化作用，可以抑制自由基生成，降低細胞損傷。
研究者也發現，氫氣的抗氧化作用是選擇性的，它不會影響身體中其他的自由基，比如說一些對身體有益的自由基。研究結果還表明，氫氣可以減少誘導細胞死亡和損傷的自由基的生成，同時增加細胞的存活率。
這篇研究的結果顯示，氫氣有潛力在各種疾病治療中發揮作用。該研究也強調了氫分子的選擇性抗氧化作用，這意味著它不會影響身體中其他自由基，從而保持了身體的平衡和健康。此外，這項研究還提供了一個新的研究方向，即利用氫分子來研究和治療各種與氧化壓力有關的疾病。
備註：
缺血再灌注（Ischemia-reperfusion）是指某些組織或器官在缺血（血液供應不足）狀態下，經過一段時間後再恢復血液供應，這個過程稱為再灌注。這種現象可能發生在多種疾病中，如心肌梗死、中風、腸道虛血等等。
作者選擇缺血再灌注是一種常見的氧化壓力實驗模型，其機制涉及多種氧化壓力反應，包括氧自由基的生成、線粒體功能受損以及細胞膜的脂質過氧化等。在缺血時，氧的供應不足導致細胞無法正常進行代謝，進而產生大量的自由基和過氧化物。隨著血流的重新灌注，氧自由基繼續產生，同時缺血期間形成的代謝廢物和有毒物質也會進入細胞，進一步增加氧化壓力。因此，缺血再灌注可以有效地誘導氧化應激反應，是研究氫氣對氧化壓力的保護作用的常用模型之一。
本篇研究氫水的製造方式，氫水的製造方式是將氫氣氣體溶解於純水中，使用氫氣產生器製造。具體而言，氫氣產生器會將水分子分解成氫氣和氧氣，再將氫氣通過管道注入純水中達到0.4ppm。